尊龙凯时推出的猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）使用说明书，旨在为猪流感病毒的检测提供高效的解决方案。
产品名称：猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）
英文名称：Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
包装规格：50T/盒
本试剂盒基于实时荧光PCR原理，能够定性检测猪流感病毒。其在猪流感及其并发症的诊断和疗效评估中具有重要的指导意义。
该试剂盒针对猪流感病毒的高度保守区域设计了特异性引物和探针。当反应体系中含有猪流感病毒基因组模板时，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相关通道信号进行实时监测，从而实现检测结果的定性分析。
试剂盒含以下组成：
1. SIV RT-PCR反应液：875 μL × 1管
2. SIV混合酶液：125 μL × 1管
3. SIV阳性对照：40 μL × 1管
4. SIV阴性对照：40 μL × 1管
5. 使用说明书：1份
注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪流感病毒靶基因的质粒。
应避光在-20℃以下保存，避免反复冻融，最大有效期为12个月。
可在多款实时荧光定量PCR仪上使用，包括ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等。
1. 取咽喉拭子和鼻拭子，应按以下方法采集：
(1) 咽喉拭子：深入喉头及上颚裂刮取3至5次，获取咽喉分泌液；
(2) 鼻拭子：深入鼻腔周围圈沾取分泌液；
(3) 将采集的拭子放入含10mL生理盐水的离心管中；
(4) 推荐使用合成纤维拭子，铝或塑料杆，避免使用棉拭子或木杆。
2. 血液或血清样品需使用无菌注射液抽取，置于离心管中待检。
3. 样本采集管应包含含有蛋白稳定剂的病毒运输液，避免交叉污染。
4. 样本应尽快检测，如不能立即检测，须在2～8℃冷藏，长期保存应冻存于-80℃以下，且避免反复冻融。
1. 试剂准备（试剂准备区）：
(1) 从冰箱取出试剂盒，融化、混匀并瞬时离心去除管壁附着液体；
(2) 计算实验所需反应数（n）：
n = 阴性对照数（1T） + 阳性对照数（1T） + 误差预留量（1T） + 样本数。
- RT-PCR反应液：175 μL
- 混合酶：25 μL
(3) 在无菌离心管中加入以上试剂，混匀后瞬时离心，按20 μL/管分装至PCR反应管。
2. 样本准备：使用QIAGEN或Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作依照说明书进行。
3. 加样：向PCR反应样本管各加入处理好的待测标本RNA 5 μL，确保终体积为25 μL/管，匀速混合后瞬时低速离心。阴性和阳性对照管各加入5 μL对应的对照品，终体积25 μL/管。
4. PCR扩增：将反应管置于实时荧光定量PCR仪样品槽，并设置相应参数进行PCR扩增。
1. 阳性对照应具有典型的扩增曲线或Ct值≤35；阴性对照应为Ct值＞38或无Ct值。
2. 标本检测结果判定：
- 阳性：Ct值≤35，或有明显指数增长期；
- 可疑：Ct值在35～38范围内，需再检测；
- 阴性：Ct值＞38或无Ct值。
1. 实验室应遵循相关基因扩增检验实验室管理规范。
2. 样本处理应在0-4℃下进行，确保不降解；所用器具应经过无核酶处理。
3. 各区域物品应专用，以免交叉污染；清洁工作台以保持卫生。
4. 注意避免气泡和液体蒸发，检测管应仔细检查是否盖紧。
5. 所有试剂应在使用前充分融化和瞬时离心。
6. 用过的吸头应直接丢入含10%次氯酸的废物缸，实验结束后需消毒工作台。
7. 不同批号试剂不得混用，确保在有效期内使用。
尊龙凯时提供的产品以其高效性和准确性，助力医学检验工作。使用本试剂盒可有效提高猪流感的检测效率。